Особливості лабораторної діагностики Listeria spp

Abstract

Лабораторна діагностика Listeria spp недосконала, так як виявлення збудника із продуктів ускладнене наявністю іншої мікрофлори. Удосконалено виявлення Listeria spp у лабораторних умовах. Збудника виділяли з харчових продуктів (м’ясо і м’ясопродукти, сир кисломолочний і твердий, риба), змивів з об’єктів довкілля, патологічного матеріалу (трупи птиці). Проведено порівняння морфологічних властивостей різних еталонних штамів Listeria spp (L. monocytogenes, L. ivanovii, L. seeligeri, L. grayi, L. welshimeri, L. innocua, L. murray). Відмічено, що усі види мають паличко- і коковидну форму, і в мазках рідко зустрічається збудник у вигляді характерної «V» форми. Для вивчення ростових властивостей та ідентифікації збудника використовували живильні селективні середовища різних виробників (Graso Biotech, Merck, Biolife Italiana, BioMerieux, HiMedia, Lab M, Difco). Найкращі результати отримано на живильних середовищах фірми Graso Biotech та Merck. Удосконалено методику первинного і вторинного накопичення для гарантованого збільшення концентрації збудника Listeria: збільшення маси наважки та зменшення об’єму розчинника, зменшення кількості бульйону Фрезера і збільшення об’єму вихідної суспензії. Удосконалення схеми проведення CAMP-тесту попереджає злиття зони гемолізу досліджуваних культур. Рекомендовано під час проведення СAMP-тесту поєднувати його з гемолітичним тестом (методом проколу), що дозволяє спостерігати дзеркальний гемоліз. Для проведення CAMP-тесту класично використовують еталонні штами Staphylococcus aureus та Rhodococcus equi, проте Listeria проявляє гемолітичні властивості і з іншими мікроорганізмами. За нашими напрацюваннями β-гемолітичними властивостями також володіють культури мікроорганізмів: Bacillus subtilis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae та Clostridium perfringens. Культури, які не володіють гемолітичними властивостями – Еscherichia соli, Enterococcus faecalis. Запропоновано визначати гемолітичні властивості Listeria за допомогою штамів мікроорганізмів – Bacillus subtilis та Escherichia соli. Для ідентифікації збудника слід застосовувати метод імуноферментного флуоресцентного аналізу на автоматичному аналізаторі Vidas, що дозволяє скоротити термін дослідження до однієї доби у разі негативного результату, на відміну від класичного (5 діб). Пропонуємо використовувати тест-систему Vidas Listeria Duo, що дозволяє ідентифікувати L. monocytogenes і Listeria spp. Використання тест-системи API Listeria10300 дозволяє визначити біохімічні властивості збудника за одну добу. За результатами проведення біопроби на мишах патогенними властивостями володіють як L. monocytogenes так і L. ivanovii. The laboratory diagnosis of Listeria spp is imperfect, and the detection of Listeria spp pathogen from the products is complicated by the presence of other microflora. Detection of Listeria spp under laboratory conditions has been improved. The causative agent Listeria spp was isolated from food (meat and meat products, sour milk and hard cheese, fish), washes from environmental objects, pathological material (poultry corpses). The morphological properties of different reference strains of Listeria spp (L. monocytogenes, L. ivanovii, L. seeligeri, L. grayi, L. welshimeri, L. innocua, L. murray) were compared. It is noted that all species have a rod-shaped and coccygeal form of microorganism. In smears it is quite rare to find a pathogen in the form of a "V" shape. Nutrient selective media from different manufacturers (Graso Biotech, Merck, Biolife Italiana, BioMerieux, HiMedia, Lab M, Difco) were used to study the growth properties and identification of the pathogen. The best results are obtained with medium from Graso Biotech and Merck. The method of primary and secondary accumulation was improved to guarantee the increase in the concentration of the Listeria pathogen: increasing the weight of the sample and reducing the volume of the solvent, reducing the amount of Freser broth and increasing the volume of the original suspension. Improvements in the scheme of CAMP-test prevent the merger of the hemolysis zone of the studied cultures. It is recommended to combine СAMP-test with a hemolytic test (puncture method), which allows to observe mirror hemolysis. The reference strains of Staphylococcus aureus and Rhodococcus equi are classically used for the CAMP-test, but Listeria exhibits hemolytic properties with other types of microorganisms. According to our practical experience also β-hemolytic cultures: Bacillus subtilis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae or Clostridium perfringens. Cultures that do not have hemolytic properties – Escherichia сolі, Enterococcus faecalis. The determination of hemolytic properties of Listeria is offered by strains of microorganisms – Bacillus subtilis and Escherichia сolі. For the identification of the pathogen, the method of enzyme-linked immunosorbent fluorescence analysis on an automatic VIDAS analyzer was used. This method shortens the study period to one day in case of a negative result as opposed to the classical one (5 days). We suggest using the VIDAS Listeria Duo test system to identify L. monocytogenes and Listeria spp. Using the Listeria10300 API test system allows one to determine the biochemical properties of the pathogen in one day. According to the results of bioassay in mice pathogenic properties have both L. monocytogenes and L. ivanovii.